摘要:本研究基于龙眼基因组数据,采用RT-PCR技术,以‘红核子’品种龙眼胚性愈伤组织cDNA为模板,进行龙眼胚性愈伤组织DlAGO4基因的克隆和生物信息学分析,生物信息学分析包括蛋白结构域及特性、启动子顺式作用元件、分子进化树分析,并对可能互作的miRNA进行预测分析,结果表明DlAGO4蛋白为碱性亲水非分泌蛋白,含有经典的保守结构域PAZ和Piwi,与柑橘的CcAGO4同源性较高,亚细胞定位预测位于细胞核,含有85个磷酸化位点和2个糖基化位点;5’端调控序列预测分析表明DlAGO4含有1个CpG岛,启动子序列含有大量光响应元件、多种激素响应元件和非生物胁迫应答元件,还含有胚乳特异表达元件及损伤修复元件;MicroRNA预测显示,DlAGO4受到3个miRNA靶向调控。利用实时荧光定量PCR技术检测DlAGO4在龙眼不同体胚阶段、不同组织部位、不同激素处理、非生物胁迫处理以及不同浓度5-氮胞苷处理下的相对表达量。从定量结果可知,在龙眼体胚发生不同阶段,DlAGO4在早期体胚阶段相对表达量较高,尤其在球形胚阶段,推测其在龙眼体胚发生早期可能发挥重要作用;在‘红核子’品种龙眼不同组织部位中DlAGO4在种子中的相对表达量最高,其次是果实中,这说明该基因可能参与龙眼种子和果实的发育;不同种类激素和非生物胁迫处理的结果表明,激动素、水杨酸、NaCl、甘露醇、PEG-4000和ABA处理均能促进该基因的表达,而2,4-D和MeJA处理确能抑制该基因的表达,推测DlAGO4可能参与不同激素和不同非生物胁迫的调控机制;不同浓度5-azac不同天数处理下,在培养1d和3d时均对DlAGO4的表达起到抑制的作用,从培养第6d开始开始促进该基因的表达,且在第12d时有最大的相对表达量,推测一定浓度的5-azac能降低龙眼EC的甲基化水平,促进体胚的发生。