铁皮石斛蔗糖磷酸合成酶基因的克隆与原核表达
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云南省重大产业项目[云发改高技(2007)1718号];国家科技支撑计划(2011BAI13B02-5)


Molecular Cloning and Prokaryotic Expression of Sucrose Phosphate Synthase Gene from Dendrobium officinale
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    摘要:

    应用同源序列克隆法克隆了铁皮石斛蔗糖磷酸合成酶(SPS)基因cDNA全长,并进行了原核表达分析,为进一步研究该基因的时空表达、功能分析及多糖合成机理提供理论依据。结果表明:(1)铁皮石斛SPS基因cDNA全长3 502 bp,编码区3 186 bp,GenBank登录号JF423929。该基因编码1 061个氨基酸,与文心兰的SPS基因氨基酸序列的一致性最高为93%,与其他科植物SPS基因的氨基酸序列的一致性均高于60%。(2)原核诱导表达结果显示,SPS基因在大肠杆菌中的重组蛋白分子质量约为118.7 kD,其表达与序列分析推测的结论一致。(3)生物信息学分析表明,铁皮石斛SPS基因的二级结构包括了螺旋、β-折叠和无规则卷曲,是非跨膜结构的亲水性不稳定蛋白,有2个功能结构域,分别是蔗糖合成功能域及糖基转移功能域。

    Abstract:

    This study used homologous sequence cloning method to clone the full length of sucrose phosphate synthase gene in Dendrobium officinale and induce prokaryotic expression.Results were as follows:(1)The cDNA is 3 502 bp in length containing an open reading frame of 3 186 bp encoding 1 061 amino acids.The GenBank accession number is JF423929.On the amino acid sequence level,this gene shows the highest similarity (93%) with SPS gene of O.goldiana.The similarity of SPS gene were higher than 60% with other plants.(2)The gene was expressed in E.coli with molecular mass of 118.7 kD,which was consistent with the speculation of Biotech.(3)Secondary structure includes helix,beta-folding and coil,which is a hydrophilic,transmembrane and unstable proteins.There are two function structure domains which are sucrose synthesis functional domain and glycosyl transfer function domain.This study provides the theory basis for research the gene spatio-temporal expression and function,polysaccharide synthesis mechanism and metabolism path in D.officinale.

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    引证文献
引用本文

孟衡玲,杨生超,查应洪,等.铁皮石斛蔗糖磷酸合成酶基因的克隆与原核表达[J].西北植物学报,2013,33(4):692-696

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  • 在线发布日期: 2013-06-17
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