棉花HSP70基因的克隆与原核表达
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新疆维吾尔自治区自然科学基金(2014211A025)


Cloning and Prokaryotic Expression of Heat Shock Protein 70 Gene in Gossypium hirsutum L.
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    摘要:

    以抗旱性较强的棉花品种‘KK1543’为材料,采用RT-PCR技术克隆了1个棉花HSP70基因,命名为GhHSP70。研究结果表明:GhHSP70基因开放阅读框长1 997 bp,编码648个氨基酸,GhHSP70蛋白相对分子量为 70.94 kD,等电点为4.83。氨基酸序列比对和系统进化树分析发现,GhHSP70与欧洲大叶杨HSP70的亲缘关系最近,氨基酸序列一致性达到96.4%。为进一步分析基因的功能,构建原核表达载体pGEX-4T-1-GhHSP70,并在大肠杆菌中异源表达。SDS-PAGE分析表明所表达蛋白与预期蛋白大小一致,重组蛋白在37 ℃,0.2 mmol/L IPTG诱导2 h时表达量最大。研究为进一步研究棉花HSP70基因功能奠定基础。

    Abstract:

    In this study,the strong drought-resistant cotton variety ‘KK1543’ was used as the material.RT-PCR method was used to clone a HSP70 gene,a gene coding for GhHSP70 was isolated from cotton (Gossypium hirsutum L.).The open reading frame was 1 997 bp,encoding 648 amino acid residues with a predicted molecular mass of 70.94 kDa and a basic isoelectric point of 4.83.Homology analysis and phylogenetic tree analysis founded that GhHSP70 shared 96.4% amino acid identity with the HSP70 from Populus trichocarpa,and GhHSP70 protein is close to PtHSP70.An expression vector pGEX-4T-1-GhHSP70 was constructed.Then,the recombinant plasmid was transformed into Escherichia coli.The SDS-PAGE results displayed that the expressed protein was consistent with the anticipated size.The expressed protein quantity induced by 0.2 mmol/L IPTG treatment for 2 h at 37 ℃ is the highest.This study provide a fundamental condition supporting research on function of GhHSP70 gene.

    参考文献
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    引证文献
引用本文

刘 娜,曲延英,陈全家,等.棉花HSP70基因的克隆与原核表达[J].西北植物学报,2015,35(4):688-693

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  • 在线发布日期: 2015-05-08
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